植物Elisa試劑盒需要遵循這幾個(gè)細節

更新時(shí)間：2019-09-24

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　　植物Elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被植物活性氧（ROS）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物活性氧（ROS）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

　　植物Elisa試劑盒需要遵循這幾個(gè)細節：抗原或抗體能吸附于固相載體外表，并堅持其免疫學(xué)活性，抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶銜接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能堅持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據參加底物的色彩反響來(lái)斷定是否有免疫反響的存在，并且色彩反響的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，可根據已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規范曲線(xiàn)并依此計算出不知道樣品中抗體或抗原的濃度。

　　樣品的濃度等指標是根據標準曲線(xiàn)計算出來(lái)的，所以首先要把做標準曲線(xiàn)看作是比做正式實(shí)驗還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗結果無(wú)從談起。

　　植物Elisa試劑盒采用倍比稀釋法配制標準曲線(xiàn)中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會(huì )出現較大的偏離。設置標準曲線(xiàn)樣品的標準濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋所要檢測實(shí)驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線(xiàn)濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線(xiàn)，盡量要使實(shí)驗樣品的濃度在中間坡度陡段，即曲線(xiàn)幾乎成直線(xiàn)的范圍內。

　　標準曲線(xiàn)的樣品數一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。檢測標準樣品時(shí)，應按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。做出的標準曲線(xiàn)相關(guān)系數因實(shí)驗要求不同而有所變動(dòng)，但一般來(lái)說(shuō)，相關(guān)系數R至少要大于0.98，對于有些實(shí)驗，至少要0.99甚至是0.999。

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