你知道影響ELISA試劑盒的因素有哪些嗎？

更新時(shí)間：2021-05-12

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　　ELISA即酶聯(lián)免疫吸附法，是一種常用的固相酶免疫測定方法。由于ELISA方法簡(jiǎn)單，方便，靈敏，特異性強且不需要特殊設備(只需要酶標儀就可以)，所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。

　　但是影響ELISA測定的因素有很多，而其操作中需要有一定的技術(shù)要求，如操作手法，環(huán)境，樣本等，有時(shí)?？梢?jiàn)到一些錯誤結果(即假陽(yáng)性或假陰性)等，小編為大家解讀ELISA檢測的影響因素之一-樣本的影響

　　樣本的影響有哪些?

　　1、樣本的保存：在冰箱中保存過(guò)久的標本，在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、會(huì )造成假陽(yáng)性;為避免上述問(wèn)題，在ELISA試劑盒測定血清標本時(shí)最好能新鮮采集;如果不能立即測定，根據相應的時(shí)間保存相應的溫度，5 d內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應-20℃低溫凍存;如凍存后融解的標本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時(shí)應輕柔，不可強烈振蕩。

　　2、樣本的時(shí)間：因為塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，所以樣本長(cháng)時(shí)間放在塑料管內會(huì )使樣本內抗原含量下降造成假陰性。*方法是使用真空采血管;并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會(huì )增加OD值，EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過(guò)氧化物酶活性。

　　3、樣本受細菌污染：因菌體中可能會(huì )含有內源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，可能會(huì )產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。

　　4、樣本的凝固：樣本凝固不全。在實(shí)驗中，有的時(shí)候心急為了爭取時(shí)間快速檢測，ELISA試劑盒在血液還未開(kāi)始凝固的時(shí)候就強行離心分離血清，導致血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過(guò)程中形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

　　5、樣本溶血：溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽(yáng)性?？赡苁侨苎逯泻羞^(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，ELISA試劑盒在洗滌過(guò)程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍色，產(chǎn)生假陽(yáng)性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。

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