大鼠丙酮酸(pyruvic acid)ELISA試劑盒僅供研究使用

大鼠丙酮酸(pyruvic acid)ELISA試劑盒配套設備-酶標儀（波長(cháng)450nm）

大鼠丙酮酸(pyruvic acid)ELISA試劑盒實(shí)驗目的

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠丙酮酸（pyruvic acid）的含量。

有效期：6個(gè)月

保存條件：2-8℃

實(shí)驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠丙酮酸（pyruvic acid）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠丙酮酸（pyruvic acid）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

大鼠丙酮酸(pyruvic acid)ELISA試劑盒組成

試劑盒組成 96孔配置 48孔配置 備注
微孔酶標板 8孔×12條 8孔×6條  無(wú)
標準品 0.3mL×6管 0.3mL×6管 無(wú)
樣本稀釋液 6mL 3mL 無(wú)
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無(wú)
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A 6mL 3mL 無(wú)
底物B 6mL 3mL 無(wú)
終止液 6mL 3mL 無(wú)
封板膜 2張 2張 無(wú)
說(shuō)明書(shū) 1份 1份 無(wú)
自封袋 1個(gè) 1個(gè) 無(wú)

備注：

1. 標準品濃度依次為：24、12、6、3、1.5、0 mg/L

2. 經(jīng)過(guò)大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實(shí)驗過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過(guò)zui大標準品濃度時(shí)，可用樣本稀釋液將標本進(jìn)行適當稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗。

樣本處理及要求

1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會(huì )影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進(jìn)行此項檢測。

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑準備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

注意事項

1. 嚴格按照規定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時(shí)避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會(huì )破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實(shí)驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。根據需要，重復此過(guò)程數次。

自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機，應在熟練使用后再用到正式實(shí)驗過(guò)程中。

實(shí)驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線(xiàn)，并得到直線(xiàn)回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

[Elisa試劑盒標準曲線(xiàn)圖]

（此圖僅供參考）

大鼠丙酮酸(pyruvic acid)ELISA試劑盒性能

1. 檢測范圍：0.75 mg/L – 24 mg/L。

2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1 mg/L。

3. 特異性：不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。

4. 重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。